非洲豬瘟PCR試劑盒
非洲豬瘟PCR試劑盒【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：通用型DNA快速提取試劑盒
商品名稱：無(wú)
漢語(yǔ)拼音：DNA Kuaisutiqushijihe
非洲豬瘟PCR試劑盒【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
本試劑盒基于硅膠吸附柱核酸純化技術(shù)，適用樣本為全血、血清和拭子(包括鼻拭子、口腔拭子、環(huán)境取樣拭子等)，僅需裂解-過(guò)柱-洗滌-洗脫四個(gè)步驟即可獲得高濃度、高純度的DNA，無(wú)蛋白質(zhì)污染。本試劑盒提取效率高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，操作方便、快捷。
用戶需自備的試劑為無(wú)水乙醇或95%以上的醫(yī)用酒精。
【產(chǎn)品內(nèi)容】
產(chǎn)品組成規(guī)格使用說(shuō)明
溶液1-蛋白酶K1 mL
溶液222 mL
溶液310 mL使用前加入15mL無(wú)水乙醇
溶液45 mL使用前加入20mL無(wú)水乙醇
溶液54 mL
DNA吸附柱50支
收集管2mL50支
離心管 1.5mL50支
【使用前注意事項(xiàng)】
1. 溶液3在使用前需加入15mL無(wú)水乙醇并充分混勻。
2. 溶液4在使用前需加入20mL無(wú)水乙醇并充分混勻。
3. 需自備若干離心管，本試劑盒提供的50支1.5mL離心管僅用于收集最終提取的DNA溶液。
4. 以下操作如非指明，均在室溫下進(jìn)行。
5. 本試劑盒贈(zèng)送1支15mL的量取乙醇專用管，所有使用無(wú)水乙醇的步驟均可用95%以上的醫(yī)用酒精替代。
6. 離心機(jī)于8000 rpm運(yùn)行時(shí)，離心力應(yīng)大于1400g;使用掌上離心機(jī)時(shí)，需將離心時(shí)間延長(zhǎng)至1min。
【操作步驟】
1. 全血、血清樣本：在1.5mL離心管中加入200μL樣本。
拭子樣本： 將1個(gè)拭子置于離心管中，加入400μL無(wú)菌生理鹽水，充分渦旋后，取200μL溶液置于1.5mL離心管中。
2. 加入20μL蛋白酶K，渦旋或顛倒混合均勻，56℃孵育10min。(無(wú)加熱設(shè)備的情況下可于室溫靜置孵育15min)
3. 加入400μL溶液2，渦旋或顛倒混合均勻，56℃孵育5min。(無(wú)加熱設(shè)備的情況下可于室溫靜置孵育5min)
注意：當(dāng)樣本為全血時(shí)，靜置5min后請(qǐng)于12000rpm離心2min，吸取上清至另一離心管。不產(chǎn)生沉淀的血清和拭子樣本可省略離心步驟。
4. 加入200μL無(wú)水乙醇，渦旋或顛倒混合均勻。
5. 將DNA吸附柱置于收集管中，將上述溶液全部轉(zhuǎn)移到DNA吸附柱中，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
6. 向DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液3，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
注意：初次使用前需向溶液3瓶中加入15mL的無(wú)水乙醇，并充分振蕩混勻。
7. 將DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液4，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
注意：初次使用前需向溶液4瓶中加入20mL的無(wú)水乙醇，并充分振蕩混勻。
8. 將DNA吸附柱重新放回收集管中，8,000 rpm空轉(zhuǎn)離心30s，棄濾液。將吸附柱打開置于室溫5分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR 等)。
9. 將DNA吸附柱置于新的1.5mL離心管中， 向吸附柱柱膜中央上方小心加入50μL 溶液5(此步驟請(qǐng)謹(jǐn)慎操作，槍頭請(qǐng)勿接觸柱膜)，8,000 rpm離心30s，洗脫液即為DNA溶液。
注意：洗脫體積不應(yīng)少于30μL，體積過(guò)小影響回收效率。DNA溶液請(qǐng)置于-20℃冰箱中保存，避免反復(fù)凍融。
【規(guī)格】 50次/盒
【貯藏及有效期】室溫(15-25℃)保存，有效期12個(gè)月。
【批準(zhǔn)文號(hào)】
【生產(chǎn)企業(yè)】 廣州悅洋生物技術(shù)有限公司
僅供獸醫(yī)診斷使用
非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
獸用
【獸藥名稱】
通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測(cè)試劑盒
商品名稱：無(wú)
漢語(yǔ)拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe
英文名稱：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus
【主要成分與含量】
序號(hào)成分含量
1PCR反應(yīng)A液1管(0.75mL/管)
2PCR反應(yīng)B液1管(0.25mL/管))
3陰性對(duì)照 1管(0.5mL/管)
4陽(yáng)性對(duì)照 1管(0.5mL/管)
5說(shuō)明書1份
【作用與用途】本試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結(jié)、脾臟等樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測(cè)。
【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品處理及模板準(zhǔn)備
請(qǐng)利用商品化試劑盒提取核酸。
1.2 熒光PCR擴(kuò)增
1.2.1 試劑準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復(fù)至室溫，使其完全融化，充分混勻后瞬時(shí)離心去除管壁吸附液體。
1.2.2 配制反應(yīng)體系
按下表1體系，在配套PCR管中配制反應(yīng)體系，蓋緊管蓋后瞬時(shí)離心10秒，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
表1 PCR反應(yīng)體系
成分體積
PCR反應(yīng)A液15μL
PCR反應(yīng)B液5μL
預(yù)準(zhǔn)備的模板(樣本/對(duì)照)5μl
總體積25μl
1.2.3 PCR擴(kuò)增
開機(jī)預(yù)熱并檢驗(yàn)儀器性能后，取配制好體系的PCR反應(yīng)管，放置在樣品槽相應(yīng)位置，記錄順序，按下表2設(shè)置擴(kuò)增參數(shù)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
表2 儀器PCR擴(kuò)增參數(shù)
階段溫度時(shí)間循環(huán)數(shù)
137℃2 min1
95℃5min1
295℃10 s45
58℃30 s(采集熒光信號(hào))
FAM通道采集熒光信號(hào)
2 判定
2.1 合理調(diào)整閾值線，不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進(jìn)行調(diào)整。
2.2 試劑盒有效性判定
·陰性對(duì)照：無(wú)Ct值，線形為直線或微斜，無(wú)明顯指數(shù)增長(zhǎng)。
·陽(yáng)性對(duì)照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，呈典型的S型曲線。
2.3 樣本結(jié)果判定
·樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤40，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，判定為陽(yáng)性，表明樣本中檢測(cè)出非洲豬瘟病毒。
·樣本檢測(cè)結(jié)果40
·樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú)Ct值，判定為陰性，表明樣本中未檢測(cè)出非洲豬瘟病毒。
【注意事項(xiàng)】
(1)實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒說(shuō)明書，嚴(yán)格按步驟執(zhí)行，不使用本試劑盒提供的組份或不按照說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。
(2)所有試劑應(yīng)在規(guī)定溫度儲(chǔ)存。-20℃保存的試劑在使用前應(yīng)充分混勻。試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過(guò)5次。
(3)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)按照國(guó)家有關(guān)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范執(zhí)行，實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)分區(qū)(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū))，各區(qū)物品為專用，不得交叉使用，避免污染。
(4)操作臺(tái)、移液器、離心機(jī)等儀器用品應(yīng)經(jīng)常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進(jìn)行消毒。耗材應(yīng)進(jìn)行無(wú)酶處理。
(5)待檢樣本、試劑盒組份及實(shí)驗(yàn)中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質(zhì)處理方法進(jìn)行處理。
(6)為防止熒光干擾，應(yīng)避免使用含熒光物質(zhì)的手套，避免用手直接接觸，預(yù)防交叉污染。
(7)檢測(cè)結(jié)果為陰性，并不完全代表為非感染狀態(tài)，具體診斷需結(jié)合獸醫(yī)臨床。
(8)產(chǎn)生假陰性的可能原因?yàn)椋捍龣z樣本在采集、運(yùn)輸、保存及核酸提取過(guò)程中操作不當(dāng)造成DNA降解;樣本中核酸濃度低于最低檢測(cè)限;病毒待測(cè)靶基因出現(xiàn)變異;未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾因素。
(9)產(chǎn)生假陽(yáng)性的可能原因?yàn)椋捍龣z樣本采集、運(yùn)輸及核酸提取過(guò)程中發(fā)生交叉污染。
【規(guī)格】 50反應(yīng)/盒
【貯藏及有效期】 試劑盒-20℃以下冷凍避光保存，有效期為12個(gè)月。
【批準(zhǔn)文號(hào)】
【生產(chǎn)企業(yè)】 廣州悅洋生物技術(shù)有限公司
